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　　本发明公开了一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，属于环保领域。本发明以蛋白核小球藻、光合细菌为原料，对蛋白和小球藻进行驯化，使其具有较强得耐污、去除能力，小球藻能够有效吸收养殖水体中的氮、磷营养物质，从而改善养殖环境，减小养殖密度的制约作用，将其与光合细菌混合，光合细菌在养殖水中直接消解有机质和硫化氢生长繁殖，水体得到了净化，藻类在新陈代谢过程中通过微藻生长繁殖改变了废水的物化性质，如废水中pH值升高，会使磷酸盐形成沉淀及NH3挥发，间接的去除了废水中的氮磷。本发明解决了目前养殖废水处理效率低，在水体中菌群分散群落的稳定性不高的问题。

　　权利要求书

　　1.一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：150~200加入富集培养基，于180r/min、25~30℃培养，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于25~30℃培养，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于25~30℃培养，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，灭菌，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于25~28℃光照培养，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：100~200：0.2~0.3加入灭菌物、混合添加物，于25~28℃光照培养，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：150~250：0.4~0.6加入灭菌物、混合添加物a，于25~28℃光照培养，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按4~7%的接种量接种至活化培养基中，于28~33℃光照培养，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：5~7加入去离子水，于60~80℃搅拌混合，再加入海藻酸钠质量质量2~4倍的混合物，搅拌混合，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间20~30min，于25~30℃搅拌混合，静置，挤压造粒，得微生物制剂。

　　2.根据权利要求1所述的处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中富集培养基是按质量份数计，取1~4份硫酸铵、20~25份丁二酸钠、2.5~4份磷酸氢二钾、1~3份硫酸镁、2~4份氯化钠、0.003~0.006份硫酸铁、0.003~0.007份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　3.根据权利要求1所述的处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入20~25份琼脂混合，即得。

　　4.根据权利要求1所述的处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中球藻培养基：按质量份数计，取10~15份硝酸钠、3~5份磷酸氢二钾、3~5份七水合硫酸镁、1~3份二水氯化钙、10~13份磷酸二氢钾、1~3份氯化钠、0.003~0.07份六水氯化铁、2~4份乙二胺四乙酸铁钠、2~5份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至6.8~7.2，121℃灭菌20min，即得。

　　5.根据权利要求4所述的处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比10~20：1~3加入六水氯化铁搅拌混合20~30min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：40~50：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠;混合溶液：按质量份数计，取0.2~0.4份硼酸、0.1~0.3份四水合氯化锰、0.02~0.04份七水合硫酸锌、0.003~0.005份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.005~0.008份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　6.根据权利要求1所述的处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中活化培养基：按质量份数计，取1~3份NH4 Cl、3~5份CH3COONa、20~25份MgCl2、0.1~0.3份CaCl2、0.4~0.8份KH2PO4 、0.3~0.5份K2HPO4、0.1~0.4份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.2±0.1，121℃灭菌20min，即得。

　　说明书

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法

　　技术领域

　　本发明属于环保领域，具体涉及一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法。

　　背景技术

　　随着我国畜禽养殖的飞速发展，我国的禽肉、猪肉、鸡蛋产量持续增加，规模化养殖场能够降低养殖场成本，增加经济收入。但是规模化也造成了养殖场的粪尿过度集中，让养殖场周围环境承受着巨大压力。养殖场废水的污染形势十分严峻，如何高效的处理养殖场废水，避免废水的肆意排放对水体和土壤造成的污染已经成为一个迫在眉睫的主要问题。

　　养殖场废水主要来源：粪便淋出液、场地冲洗水和尿液。其特点是成分复杂，有机物浓度和氨氮浓度都很高，而且含有一定的抗生素和重金属。现有的方法是对养殖用水进行简单沉淀后再直接进行微生物净化，然后直接送回池塘进行养殖，以微生物为主体的生物修复技术在水产养殖水质控制上的应用非常广泛。养殖水体中存在着由多样性的微生物构成的微生态系统，大多数情况下，养殖水体自然条件不能完全满足生物修复的要求，或天然生物修复的效率和速度太低。投加外源微生物是优化微生态系统的重要途径，它一方面可以调节生物降解微生态系统中微生物种群和群落的相互作用，另一方面可以提高微生态系统中微生物浓度和代谢活性。但在实际操作中净化效果差强人意，在水体中菌群分散群落的稳定性不高。因此，提供一种处理养殖废水的微生物制剂来解决上述问题尤为重要。

　　发明内容

　　本发明所要解决的技术问题：针对目前养殖废水处理效率低，在水体中菌群分散群落的稳定性不高的问题，提供一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法。

　　为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：150~200加入富集培养基，于180r/min、25~30℃培养，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于25~30℃培养，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于25~30℃培养，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，灭菌，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于25~28℃光照培养，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：100~200：0.2~0.3加入灭菌物、混合添加物，于25~28℃光照培养，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：150~250：0.4~0.6加入灭菌物、混合添加物a，于25~28℃光照培养，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按4~7%的接种量接种至活化培养基中，于28~33℃光照培养，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：5~7加入去离子水，于60~80℃搅拌混合，再加入海藻酸钠质量质量2~4倍的混合物，搅拌混合，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间20~30min，于25~30℃搅拌混合，静置，挤压造粒，得微生物制剂。

　　所述步骤(1)中富集培养基是按质量份数计，取1~4份硫酸铵、20~25份丁二酸钠、2.5~4份磷酸氢二钾、1~3份硫酸镁、2~4份氯化钠、0.003~0.006份硫酸铁、0.003~0.007份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　所述步骤(2)中纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入20~25份琼脂混合，即得。

　　所述步骤(3)中球藻培养基：按质量份数计，取10~15份硝酸钠、3~5份磷酸氢二钾、3~5份七水合硫酸镁、1~3份二水氯化钙、10~13份磷酸二氢钾、1~3份氯化钠、0.003~0.07份六水氯化铁、2~4份乙二胺四乙酸铁钠、2~5份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至6.8~7.2，121℃灭菌20min，即得。

　　所述乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比10~20：1~3加入六水氯化铁搅拌混合20~30min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：40~50：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠;混合溶液：按质量份数计，取0.2~0.4份硼酸、0.1~0.3份四水合氯化锰、0.02~0.04份七水合硫酸锌、0.003~0.005份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.005~0.008份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　所述步骤(4)中活化培养基：按质量份数计，取1~3份NH4 Cl、3~5份CH3COONa、20~25份MgCl2、0.1~0.3份CaCl2、0.4~0.8份KH2PO4 、0.3~0.5份K2HPO4、0.1~0.4份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.2±0.1，121℃灭菌20min，即得。

　　本发明与其他方法相比，有益技术效果是：

　　(1)本发明微生物在有氧的条件下将氨氮氧化为亚硝酸盐氮，再进一步氧化为硝酸盐氮，而自养硝化菌增长速度比较缓慢，对环境条件要求严格，其最佳温度为 35~42℃，在低温时(尤其是冬季)硝化速率低，硝化过程需要较高的溶解氧浓度(>3 mg/L)，中性偏碱(7.0~8.0)的pH条件以及非常低的C/N值，为了提高硝化速率与自养硝化菌相比，异养硝化菌具有生长速度快，环境适应能力强等特点，从土壤中筛选具有高脱氮能力的异养硝化菌，加入丁二酸钠为唯一碳源，加入培养过程中废水中的铵盐没有被氧化成亚硝酸盐和硝酸盐，而是大部分被转化成了菌体内的胞内氮，在实际的污水处理过程中，这部分的氮将转移至剩余污泥中，从而提高了剩余污泥中氮的含量及肥效，有利于后续通过堆肥等过程将养殖场废水处理产生的污泥开发成作物肥料;

　　(2)本发明以蛋白核小球藻、光合细菌为原料，对蛋白核小球藻进行驯化，使其具有较强的耐污、去污能力，小球藻能够有效吸收养殖水体中的氮、磷营养物质，从而起到改善养殖环境，减小养殖密度的制约作用，将其与光合细菌混合，光合细菌在养殖水中直接消解有机质和硫化氢生长繁殖，水体得到了净化，藻类在新陈代谢过程中通过微藻生长繁殖改变了废水的物化性质，如废水中pH值升高，会使磷酸盐形成沉淀及NH3挥发，间接的去除了废水中的氮磷，微藻通过细胞壁和细胞膜上的脂质将大量有机物吸收，然后将其降解为小分子物质，这些物质可以被周围的细菌利用，细菌也会向周围环境释放酶类、维生素、糖肽类物质可以促进藻类的生长，治理养殖废水时，通过细菌的作用，含碳有机物分解成为CO2和H2O，含磷有机物消解成为正磷酸盐，含氮有机物氨化或硝化成为硝酸盐、亚硝酸盐和氨氮，这些小分子物质为藻类提供了碳、氮和磷，藻类通过新陈代谢将这些物质转化为自身的细胞成分，藻类通过光合作用释放出氧气，使水环境中的氧含量升高，又为某些好氧菌的新陈代谢提供了良好的水环境;

　　(3)本发明利用海藻酸钠、氯化钙藻菌细胞球粒进行固定化，对氮磷的去除效果较好，除了溶液挥发和包埋载体的吸附作用之外，主要是因为球粒内部的多孔和缝隙结构，为微藻和细菌提供了良好的生长繁殖条件为藻菌和底物的接触提供了较大表面积，水产养殖废水与球粒内部的微藻和菌类细胞接触面积越大，各种营养盐更容易进入固定化藻菌细胞球粒的内部，固定化使藻菌的浓度大大增加，对氮磷的去除效率也大大提高了，同时也具有缓释性能，延长了微生物制剂处理养殖废水的效果。

　　具体实施方式

　　土壤：取自浙江省舟山市长峙岛马鞍村农田土壤。

　　富集培养基：按质量份数计，取1~4份硫酸铵、20~25份丁二酸钠、2.5~4份磷酸氢二钾、1~3份硫酸镁、2~4份氯化钠、0.003~0.006份硫酸铁、0.003~0.007份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入20~25份琼脂混合，即得。

　　球藻培养基：按质量份数计，取10~15份硝酸钠、3~5份磷酸氢二钾、3~5份七水合硫酸镁、1~3份二水氯化钙、10~13份磷酸二氢钾、1~3份氯化钠、0.003~0.07份六水氯化铁、2~4份乙二胺四乙酸铁钠、2~5份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至6.8~7.2，121℃灭菌20min，即得。

　　乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比10~20：1~3加入六水氯化铁搅拌混合20~30min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：40~50：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠。

　　混合溶液：按质量份数计，取0.2~0.4份硼酸、0.1~0.3份四水合氯化锰、0.02~0.04份七水合硫酸锌、0.003~0.005份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.005~0.008份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　活化培养基：按质量份数计，取1~3份NH4 Cl、3~5份CH3COONa、20~25份MgCl2、0.1~0.3份CaCl2、0.4~0.8份KH2PO4 、0.3~0.5份K2HPO4、0.1~0.4份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.2±0.1，121℃灭菌20min，即得。

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：150~200加入富集培养基，于180r/min、25~30℃培养2~3天，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养2~3天，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物2~3天，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于25~30℃培养物2~3天，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于25~30℃培养2~3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线2~3次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于25~30℃培养18~24h，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于95~100℃搅拌混合2~3h，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，121℃灭菌20min，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于25~28℃光照培养1~2天，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：100~200：0.2~0.3加入灭菌物、混合添加物，于25~28℃光照培养1~2天，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：150~250：0.4~0.6加入灭菌物、混合添加物a，于25~28℃光照培养1~2天，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按4~7%的接种量接种至活化培养基中，于28~33℃光照培养2~3天，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：5~7加入去离子水，于60~80℃搅拌混合30~40min，再加入海藻酸钠质量质量2~4倍的混合物，搅拌混合1~2h，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间20~30min，于25~30℃搅拌混合30~40min，静置1~2h，挤压造粒，得微生物制剂。

　　土壤：取自浙江省舟山市长峙岛马鞍村农田土壤。

　　富集培养基：按质量份数计，取1份硫酸铵、20份丁二酸钠、2.5份磷酸氢二钾、1份硫酸镁、2份氯化钠、0.003份硫酸铁、0.003份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入20份琼脂混合，即得。

　　球藻培养基：按质量份数计，取10份硝酸钠、3份磷酸氢二钾、3份七水合硫酸镁、1份二水氯化钙、10份磷酸二氢钾、1份氯化钠、0.003份六水氯化铁、2份乙二胺四乙酸铁钠、2份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至6.8，121℃灭菌20min，即得。

　　乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比10：1加入六水氯化铁搅拌混合20min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：40：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠。

　　混合溶液：按质量份数计，取0.2份硼酸、0.1份四水合氯化锰、0.02份七水合硫酸锌、0.003份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.005份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　活化培养基：按质量份数计，取1份NH4 Cl、3份CH3COONa、20份MgCl2、0.1份CaCl2、0.4份KH2PO4 、0.3份K2HPO4、0.1份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.1，121℃灭菌20min，即得。

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：150加入富集培养基，于180r/min、25℃培养2天，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于25℃培养2天，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于25℃培养物2天，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于25℃培养物2天，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于25℃培养2天，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线2次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于25℃培养18h，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于95℃搅拌混合2h，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，121℃灭菌20min，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于25℃光照培养1天，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：100：0.2加入灭菌物、混合添加物，于25℃光照培养1天，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：150：0.4加入灭菌物、混合添加物a，于25℃光照培养1天，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按4%的接种量接种至活化培养基中，于28℃光照培养2天，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：5加入去离子水，于60℃搅拌混合30min，再加入海藻酸钠质量质量2倍的混合物，搅拌混合1h，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间20min，于25℃搅拌混合30min，静置1h，挤压造粒，得微生物制剂。

　　土壤：取自浙江省舟山市长峙岛马鞍村农田土壤。

　　富集培养基：按质量份数计，取4份硫酸铵、25份丁二酸钠、4份磷酸氢二钾、3份硫酸镁、4份氯化钠、0.006份硫酸铁、0.007份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入25份琼脂混合，即得。

　　球藻培养基：按质量份数计，取15份硝酸钠、5份磷酸氢二钾、5份七水合硫酸镁、3份二水氯化钙、13份磷酸二氢钾、3份氯化钠、0.07份六水氯化铁、4份乙二胺四乙酸铁钠、5份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至7.2，121℃灭菌20min，即得。

　　乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比20：3加入六水氯化铁搅拌混合30min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：50：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠。

　　混合溶液：按质量份数计，取0.4份硼酸、0.3份四水合氯化锰、0.04份七水合硫酸锌、0.005份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.008份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　活化培养基：按质量份数计，取3份NH4 Cl、5份CH3COONa、25份MgCl2、0.3份CaCl2、0.8份KH2PO4 、0.5份K2HPO4、0.4份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.3，121℃灭菌20min，即得。

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：200加入富集培养基，于180r/min、30℃培养3天，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于30℃培养3天，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于30℃培养物3天，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于30℃培养物3天，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于30℃培养3天，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线3次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于30℃培养24h，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于100℃搅拌混合3h，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，121℃灭菌20min，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于28℃光照培养2天，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：200：0.3加入灭菌物、混合添加物，于28℃光照培养2天，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：250：0.6加入灭菌物、混合添加物a，于28℃光照培养2天，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按7%的接种量接种至活化培养基中，于33℃光照培养3天，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：7加入去离子水，于80℃搅拌混合40min，再加入海藻酸钠质量质量4倍的混合物，搅拌混合2h，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间30min，于30℃搅拌混合40min，静置2h，挤压造粒，得微生物制剂。

　　土壤：取自浙江省舟山市长峙岛马鞍村农田土壤。

　　富集培养基：按质量份数计，取3份硫酸铵、23份丁二酸钠、3份磷酸氢二钾、2份硫酸镁、3份氯化钠、0.004份硫酸铁、0.005份硫酸锰、1000份水，121℃灭菌20min。

　　纯化培养基：富集培养基其他组分不变，加入23份琼脂混合，即得。

　　球藻培养基：按质量份数计，取13份硝酸钠、4份磷酸氢二钾、4份七水合硫酸镁、2份二水氯化钙、12份磷酸二氢钾、2份氯化钠、0.05份六水氯化铁、3份乙二胺四乙酸铁钠、3份混合溶液、1000份蒸馏水，调节pH至7，121℃灭菌20min，即得。

　　乙二胺四乙酸铁钠：取质量分数为20%的盐酸按质量比15：2加入六水氯化铁搅拌混合25min，得搅拌混合物，取搅拌混合物按质量比10：45：1加入EDTA二钠、蒸馏水混合，即得乙二胺四乙酸铁钠。

　　混合溶液：按质量份数计，取0.3份硼酸、0.2份四水合氯化锰、0.03份七水合硫酸锌、0.004份(NH4)6Mo7O24·4H2O、0.007份CuSO4·5H2O、100份水混合，即得混合溶液。

　　活化培养基：按质量份数计，取2份NH4 Cl、4份CH3COONa、23份MgCl2、0.2份CaCl2、0.6份KH2PO4 、0.4份K2HPO4、0.3份酵母膏、1000份蒸馏水，pH 7.2，121℃灭菌20min，即得。

　　一种处理养殖废水的微生物制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

　　(1)取土壤按质量比1：175加入富集培养基，于180r/min、27℃培养2天，得培养物，取培养物按25%的接种量接种至富集培养基中，于27℃培养2天，得一级培养物，取一级培养物按15%的接种量接种至富集培养基中，于27℃培养物2天，得二级培养物，取二级培养物按10%的接种量接种至富集培养基中，于27℃培养物2天，得驯化培养物;

　　(2)取驯化培养物按质量比1：9加入生理盐水混合，得混合液，取混合液稀释至10-6的稀释级，得稀释液，取稀释液涂布于纯化培养基，于27℃培养2天，挑取菌径最大的菌落划线接种至纯化培养基培养，重复划线2次，得纯化菌落，取纯化菌落接种至富集培养基中，于27℃培养21h，离心，取沉淀，冷冻干燥，得干燥物，备用;

　　(3)取土壤按质量2：5加入蒸馏水，于97℃搅拌混合2h，冷却至室温，取上清液，取球藻培养基按质量比10：3加入上清液，121℃灭菌20min，得灭菌物，取蛋白核小球藻按5%的接种量接种至灭菌物中，于27℃光照培养1天，得培养物a，取氯化铵按质量比5：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物，取培养物按质量比5：150：0.2加入灭菌物、混合添加物，于27℃光照培养1天，得初级驯化培养物，取氯化铵按质量比20：1：5加入硝酸钠、磷酸氢二钾混合，得混合添加物a，取初级驯化培养物按质量比6：200：0.5加入灭菌物、混合添加物a，于27℃光照培养1天，得二级驯化培养物，离心，取沉淀a;

　　(4)取沼泽红假单胞菌按5%的接种量接种至活化培养基中，于30℃光照培养2天，得活化培养物，离心，取沉淀b，取沉淀a按质量比2：1加入沉淀b混合，干燥，粉碎，过100目筛，收集混合过筛颗粒;

　　(5)取步骤(2)备用的干燥物按质量比2：1 加入混合过筛颗粒混合，得混合物，取海藻酸钠按质量比1：6加入去离子水，于70℃搅拌混合35min，再加入海藻酸钠质量质量3倍的混合物，搅拌混合1h，得搅拌混合物，取质量分数为6%的氯化钙溶液滴入至搅拌混合物，控制滴入时间25min，于27℃搅拌混合35min，静置1h，挤压造粒，得微生物制剂。

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